Wie verpackt man eine Säule als Vorbereitung für die Gelfiltration?

Hier ist das Schritt-für-Schritt-Verfahren zum Packen einer Säule in der Gelfiltrationschromatographie. Zunächst muss die Glassäule in einer ebenen Position senkrecht an einem Ringständer aufgehängt werden. 1m Schlauch muss an den Absperrhahn angeschlossen und der Absperrhahn an der Säule befestigt werden. Als nächstes müssen 50 mM Tris, pH 7,5 oder Tris-Puffer bis zu einem Drittel hinzugefügt werden. Das G-75 oder Gel muss als nächstes geschwenkt werden, vermeiden Sie es, dasselbe zu rühren. Gießen Sie das Gel mit einem Plastiktrichter in die Säule. Öffnen Sie den Absperrhahn und sammeln Sie den eluierten Puffer, nachdem Sie zwei Minuten gewartet haben. Fügen Sie weiterhin Gel hinzu, wenn der Flüssigkeitsstand sinkt. Dies sollte fortgesetzt werden, bis die gepackte Portion in die Nähe des gelben Kragens auf der Glassäule gelangt. Lassen Sie einen Puffer von 1-2 cm dicht am Absperrhahn.Zu diesem Zeitpunkt sollte ein m Tygon-Schlauch mit dem Deckel der Säule verbunden und das freie Ende in einen 250-ml-Kolben mit 200 ml Tris-Puffer eingehängt werden. Lösen Sie den Schlauch, nachdem Sie ihn mit dem Deckel der Säule verbunden haben. Die 40 ml Puffer sollten kontinuierlich gewaschen und die Flussrate notiert werden.